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从事了多年的实验准备工作,下面结合实践谈一下观察DNA和RNA在细胞中的分布实验准备。
一、实验材料用具
1材料:人的口腔上皮细胞、洋葱
2仪器:显微镜 载玻片2 盖玻片2 吸水纸 大烧杯250ml 小烧杯50ml 温度计 消毒牙签(用一头尖一头钝的牙签) 铁架台( 改用三角架) 石棉网 火柴 酒精灯 滴管(去掉 )(另加 :口杯 纯净水 擦镜纸 镊子 培养皿)
3药品:质量分数0.9%的NaCI溶液 质量分数0.8%的盐酸溶液 吡咯红甲基绿染色剂A、B液 工业酒精(加入酒精灯)
4清理:废物桶 抹布 盐酸回收用烧杯
5准备说明:
说明1 :制片前要对载玻片和盖玻片进行清洗,即使是刚买来的新玻片也要进行清洗。下面就新玻片和使用过的玻片的清洗方法分别介绍:
(1)新玻片的清洗方法是:将玻片放入95﹪酒精溶液中,浸泡数小时。玻片要一片一片的放入盛有酒精的容器中,使酒精能浸润每一张玻片。浸洗后将玻片捞出,趁酒精未干之前,用清洁布擦干,放入盒中备用。
(2)使用过的玻片的清洗,可以分四步来做:
①将废旧玻片浸入二甲苯中,(二甲苯可反复使用)一天后盖玻片即会脱离载玻片。
②将玻片取出放入洗衣粉液中煮沸30分钟取出后用自来水漂洗数次,洗去洗衣粉。
③将玻片浸入清洁液中,浸1-2天取出。
小资料:
清洁液的配方:
重铬酸钾20克
浓硫酸40毫升
水140毫升
配制方法:先将重铬酸钾溶于水中然后将硫酸一滴一滴的加入,不使溶液发热。不允许将硫酸一下子倒入,更不允许将重铬酸钾水溶液倒入盛硫酸的容器内。否则就可能使硫酸飞溅出来,造成意外事故。
④洗净的玻片用洁净的软布擦干。由于盖玻片很薄,擦时须特别小心。擦时用左手拇指和食指夹住玻片的两边。右手持布用大拇指和食指同时擦拭盖玻片的两面。两指用力需均匀,着力点也应一致,才不会擦破盖玻片。
说明2:实验时,要准备口杯、凉开水。一定不要用烧杯代替。
说明3:选用一头尖一头钝的牙签。尖的牙签容易划伤口腔,并且沾取细胞的面积小,不容易刮取较多的细胞。
二:染色剂的配制方法 1、染色剂A液的两种配制方法 ①用吡罗红甲基绿混装粉配制A液的方法:取吡罗红甲基绿粉1 g,加入到100 mL蒸馏水中溶解,然后用滤纸过滤,将滤液放入棕色瓶中备用。 ②分别用甲基绿和吡罗红G配制A液的方法:取甲基绿2 g溶于98 mL蒸馏水中,取吡罗红G 5 g溶于95 mL蒸馏水中。取6 mL甲基绿溶液和2 mL吡罗红溶液加入到16 mL蒸馏水中,即为A液,放入棕色瓶中备用。(注意:用于核酸染色的是吡罗红G,请不要错买吡罗红B。) 2、染色剂B液的配制方法 B液是一种缓冲液,由乙酸钠和乙酸混合而成。先取乙酸钠16.4 g,用蒸馏水溶解至1 000 mL备用;再取乙酸12 mL,用蒸馏水稀释至1 000 mL备用。取配好的乙酸钠溶液30 mL和稀释的乙酸20 mL,加蒸馏水50 mL,配成pH为4.8的B液(缓冲液)。 3、染色剂的配制 染色剂是由A液、B液混合配制而成的。取A液20 mL和B液80 mL混合,就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是该试剂应现用现配。
三、课时数1课时
四、课前准备工作
1、清理实验室卫生,检查实验室光源、水源等是否可以使用。
2、准备实验用具,配制实验药品。
3、指导学生预习有关实验内容。
4、给学生进行分组。
5、设计教学方案。
2008年12月19日星期五
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